1型糖尿病是選擇性針對(duì)胰島β細(xì)胞的自身免疫性疾病，自身反應(yīng)性T、B細(xì)胞的激活及自身抗體分泌的增加可能與胰島的免疫炎癥損傷有關(guān)；然而，目前對(duì)于引起免疫損傷的具體效應(yīng)細(xì)胞及分子機(jī)制尚不清楚。近年來的研究表明，一種新的T細(xì)胞亞型——Th17輔助性T細(xì)胞是免疫炎癥損傷的重要效應(yīng)細(xì)胞。在多種自身免疫性疾病中均發(fā)現(xiàn)Th17輔助性T細(xì)胞升高。白細(xì)胞介素-17A是Th17輔助性T細(xì)胞分泌的特征性細(xì)胞因子，也是Th17輔助性T細(xì)胞參與免疫反應(yīng)的重要效應(yīng)分子。在NOD糖尿病鼠中進(jìn)行的研究顯示，1型糖尿病鼠胰腺和脾臟中均有白細(xì)胞介素-17A表達(dá)，白細(xì)胞介素-17A表達(dá)水平下降與糖尿病病情減輕有關(guān)，提示白細(xì)胞介素-17A可能參與1型糖尿病的發(fā)生。本研究通過檢測(cè)1型糖尿病患者外周血Th17輔助性T細(xì)胞和血漿白細(xì)胞介素-17A水平，了解Th17輔助性T細(xì)胞是否與人類1型糖尿病的發(fā)病有關(guān)；同時(shí)檢測(cè)血漿B細(xì)胞活化因子水平，試圖探討Th17輔助性T細(xì)胞與B細(xì)胞在1型糖尿病發(fā)生中的關(guān)系，為闡明Th17輔助性T細(xì)胞參與1型糖尿病的機(jī)制提供線索。

　　對(duì)象與方法

　　一、研究對(duì)象

　　選取2009年1月至2010年12月在武漢大學(xué)中南醫(yī)院內(nèi)分泌科就診的門診及住院1型糖尿病患者39例（1型糖尿病組），其中男21例，女18例，平均年齡（31±13）歲，病程3個(gè)月至18年，平均病程（7±6）年，均有酮癥酸中毒病史，均已接受胰島素治療，糖化血紅蛋白7.0%~8.0%，平均糖化血紅蛋白7.4%±0.3%。選擇同期住院的2型糖尿病患者40例（2型糖尿病組），其中男28例，女12例，平均年齡（36±8歲），病程6個(gè)月至16年，平均病程（7±5）年，糖化血紅蛋白7.0%~8.0%，平均糖化血紅蛋白7.2%±0.3%。糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)參考1999年世界衛(wèi)生組織制定的標(biāo)準(zhǔn)，即空腹血糖>7.0 mmol/L，餐后2 h或糖耐量試驗(yàn)2 h血糖>11.1 mmol/L。所有病例均排除感染或伴發(fā)其他自身免疫性疾病。另選取在武漢大學(xué)中南醫(yī)院接受體檢的健康志愿者36名（健康對(duì)照組），其中男19名，女17名，平均年齡（29±12）歲。研究經(jīng)武漢大學(xué)中南醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施，所有入選對(duì)象均按要求簽署知情同意書。

　　二、研究方法

　　（一）放免法檢測(cè)空腹C肽水平

　?。ǘ┟嘎?lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿B細(xì)胞活化因子和白細(xì)胞介素-17A水平

　　（三）流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血Th17輔助性T細(xì)胞水平

　?。ㄋ模晒鈱?shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)RORγt基因表達(dá)水平

　　三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

　　采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，正態(tài)分布資料兩組間比較采用t檢驗(yàn)，3組間比較采用單因素方差分析。白細(xì)胞介素-17A、B細(xì)胞活化因子、RORγt mRNA、Th17輔助性T細(xì)胞的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，采用多元線性回歸分析評(píng)價(jià)空腹C肽與其他各變量的關(guān)系。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　結(jié)果

　　一、 各組受試者一般資料比較

　　1型糖尿病組和2型糖尿病組病程、糖化血紅蛋白水平、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇無顯著差異，但2型糖尿病組年齡明顯大于1型糖尿病組（t=13.390，P=0.000），空腹C肽水平顯著高于1型糖尿病組（t=22.030，P=0.000）,有極顯著差異。1型糖尿病組甘油三酯水平顯著高于健康對(duì)照組（t=14.997，P=0.000）；低密度脂蛋白膽固醇水平雖高于健康對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.190，P=0.076；表1）。

　　二、各組受試者血漿白細(xì)胞介素-17A、B細(xì)胞活化因子、Th17輔助性T細(xì)胞和RORγt基因表達(dá)水平比較

　　1型糖尿病組血漿白細(xì)胞介素-17A、 B細(xì)胞活化因子、外周血Th17輔助性T細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞RORγt mRNA表達(dá)水平高于健康對(duì)照組（t值分別為5.601、6.211、8.338、12.112，P值分別為0.021、0.015、0.005、0.001），亦高于2型糖尿病組（t值分別為14.970、6.527、4.950、34.470，P值分別為0.000、0.013、0.029、0.000）。與健康對(duì)照組相比，2型糖尿病組組血漿白細(xì)胞介素-17A、B細(xì)胞活化因子、外周血Th17輔助性T細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞RORγt mRNA表達(dá)水平輕度增高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值分別為1.272、0.020、1.449、2.347，P值分別為0.263、0.888、0.233、 0.130；表2）。受試者Th17輔助性T細(xì)胞的流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果見圖1~3，其中1型糖尿病患者Th17輔助性T細(xì)胞的比例為5.7%（圖1），2型糖尿病患者Th17輔助性T細(xì)胞的比例為1.2%（圖2），健康對(duì)照者Th17輔助性T細(xì)胞的比例為1.1%（圖3）。

　　三、B細(xì)胞活化因子與白細(xì)胞介素-17A、Th17輔助性T細(xì)胞和RORγt mRNA的關(guān)系偏相關(guān)分析結(jié)果顯示，B細(xì)胞活化因子與白細(xì)胞介素-17A水平呈顯著正相關(guān)（r=0.623，P=0.000），與Th17輔助性T細(xì)胞呈正相關(guān)（r=0.39，P=0.018）。然而，在排除Th17輔助性T細(xì)胞和白細(xì)胞介素-17A的影響后，B細(xì)胞活化因子與RORγtmRNA呈負(fù)相關(guān)（r=－0.55，P=0.000）。

　　四、1型糖尿病患者胰島功能與各項(xiàng)觀察指標(biāo)的關(guān)系

　　以空腹C肽為因變量，1型糖尿病病程、Th17輔助性T細(xì)胞、白細(xì)胞介素-17A、RORγt基因表達(dá)、B細(xì)胞活化因子為自變量，行多元逐步回歸分析，結(jié)果顯示，Th17輔助性T細(xì)胞與空腹C肽水平呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01），B細(xì)胞活化因子與空腹C肽水平呈正相關(guān)（P<0.05），回歸方程為C肽=0.161－0.069×Th17輔助性T細(xì)胞+0.003×B細(xì)胞活化因子（F=53.594，P=0.011）。

　　研究表明，白細(xì)胞介素-17A可與B細(xì)胞活化因子協(xié)同減少自身反應(yīng)性B細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)其向漿細(xì)胞的分化及自身抗體的分泌，而自身反應(yīng)性B細(xì)胞分泌自身抗體需要Th17輔助性T細(xì)胞的輔助。另外，B細(xì)胞活化因子促進(jìn)炎癥反應(yīng)需要白細(xì)胞介素-17的參與，B細(xì)胞活化因子基因沉默可抑制前炎癥因子、漿細(xì)胞和Th17輔助性T細(xì)胞的生成，而敲除白細(xì)胞介素-17鼠B細(xì)胞活化因子對(duì)于促進(jìn)關(guān)節(jié)炎的發(fā)展無明顯作用。這些研究結(jié)果提示，Th17輔助性T細(xì)胞和B細(xì)胞之間的相互作用與白細(xì)胞介素-17A和B細(xì)胞活化因子有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，白細(xì)胞介素-17A與B細(xì)胞活化因子在1型糖尿病患者中顯著升高，二者呈正相關(guān)，而在2型糖尿病患者中僅輕度升高，且與健康對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，由此可推測(cè)白細(xì)胞介素-17A和B細(xì)胞活化因子可能參與1型糖尿病的發(fā)病。Th17輔助性T細(xì)胞可能通過分泌白細(xì)胞介素-17A促進(jìn)B細(xì)胞活化因子的分泌，進(jìn)而影響B(tài)細(xì)胞的存活及自身抗體的分泌。Th17輔助性T細(xì)胞促進(jìn)B細(xì)胞存活可能是其參與1型糖尿病發(fā)病的途徑之一。