B7-H1（PD-L1）是B7家族的一個新成員， 其受體是PD-1. B7-H1與PD-1的相互作用抑制T細胞的增殖和細胞因子的分泌。 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)人的胃癌、急性淋巴細胞瘤等腫瘤組織中均有B7-H1的異常表達， 且腫瘤細胞上表達的B7-H1在體外能介導抗原特異性T細胞的凋亡。然而關(guān)于結(jié)腸癌組織中B7-H1的表達及其臨床意義至今國內(nèi)未見詳細報道。 近年來， 結(jié)腸癌的發(fā)病率逐漸升高， 且我們觀察到這樣一種現(xiàn)象： 即有些分化較好、發(fā)現(xiàn)較早的結(jié)腸癌手術(shù)時卻已存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移， 甚至遠處轉(zhuǎn)移。在此我們運用免疫組化方法研究了結(jié)腸癌組織中B7-H1的表達， 并結(jié)合傳統(tǒng)的臨床病理指標， 探討其與結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。收集鄭州大學第二附屬醫(yī)院2006-10/2008-02內(nèi)鏡以及手術(shù)切除的共64例新鮮結(jié)腸癌標本， 其中18例手術(shù)切除的標本均取癌組織、癌旁組織（距癌組織>5 cm的正常組織）各1份， 標本均經(jīng)病理證實， 新鮮組織標本立即用OCT膠包埋后入-80℃保存。 患者年齡38-71歲， 其中男43例， 女21例， 所有患者術(shù)前未接受化療和（或）放療。

    1.方法：

    將用OCT膠包埋好的組織標本用恒冷冰凍切片機（American Optical HistoSTATMicroTOME）-20℃下連續(xù)冠狀切片， 切成5 μm厚的冰凍切片， 室溫晾干后， 入40 g/L多聚甲醛中固定， 再用PBS沖洗。 以下步驟按照Histostain-Plus Kit（晶美生物工程有限公司）說明書進行操作， 依次經(jīng)3 mL/L H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶，體積分數(shù)為100 g/L山羊血清封閉， 滴加小鼠抗人B7-H1 mAb（1∶100）， 4℃過夜。 次晨依次加抗小鼠生物素化二抗和標記HRP鏈親和素， DAB顯色， 蘇木素復染細胞核。 以PBS代替一抗作為陰性對照。 每個標本隨機觀測10個高倍視野（400×）， 以細胞質(zhì)中含大量粗大棕黃色顆粒的細胞為陽性細胞， 基本不含或無粗大棕黃色顆粒的細胞為陰性細胞。 結(jié)腸癌組織中著色的B7-H1陽性細胞少于10%為B7-H1表達陰性， 大于10%為表達陽性。

    2 結(jié)果：

    2.1 不同結(jié)腸組織中B7-H1蛋白的表達 免疫組織化學分析顯示， B7-H1蛋白在結(jié)腸癌組織中呈陽性表達， 陽性表達率為48.44%（31/64例）， 陽性染色位于結(jié)腸癌細胞的細胞膜和細胞質(zhì)中， 呈淡黃色至棕黃色細顆粒， 細胞核不染色； 而B7-H1在結(jié)腸癌旁組織中表達較弱或者不表達，其陽性表達率僅為22.22%（4/18例）， 兩者間有差異。

    2.2 B7-H1在結(jié)腸癌組織中的表達與臨床病理指標的關(guān)系 在64例結(jié)腸癌標本中， 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組B7-H1陽性表達25例（陽性率為65.79%）， 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組6例（陽性率為23.08%）有差異，而在結(jié)腸癌組織中B7-H1的表達與結(jié)腸癌的浸潤深度、分化程度、臨床分期等無關(guān)（P >0.05, 表1）。 這表明， B7-H1的表達可能與結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

    3 討論

    腫瘤的發(fā)病機制目前尚不十分清楚， 但是腫瘤發(fā)生上的免疫逃避機制是其發(fā)生的重要機制之一。 近年來， 圍繞腫瘤細胞逃逸免疫的途徑做了多方面的研究， B7家族是這方面研究的一個熱點。 B7-H1是近年發(fā)現(xiàn)的B7家族的新成員之一，其對調(diào)節(jié)T細胞和B細胞反應有很明顯的效應。研究證實， B7-H1除了在淋巴組織表達外， 還在非淋巴組織表達， 且B7-H1在非淋巴組織上的表達可以調(diào)節(jié)外周器官中T細胞和B細胞的免疫反應和炎癥反應。以往雖有研究證實， B7-H1在體外可通過其抑制性受體PD-1抑制Th1為主的免疫反應， 從而在誘導T細胞凋亡和腫瘤免疫逃避中發(fā)揮重要作用。迄今尚未見B7-H1表達與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性的報道。 存在早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是臨床上近年來發(fā)現(xiàn)的結(jié)腸癌的特點， 并對結(jié)腸癌患者的愈后影響很大， 我們迫切需要揭開結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機制。本研究結(jié)果表明， B7-H1蛋白在結(jié)腸癌組織中的陽性表達率顯著高于其在結(jié)腸癌旁組織中的陽性表達率， 結(jié)合以前在其他腫瘤中的報道， 提示B7-H1確實參與了結(jié)腸癌的發(fā)生。 且發(fā)現(xiàn)， B7-H1在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中的表達要比未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌組織中含量明顯升高， 其發(fā)生機制可能與B7-H1的受體PD-1或者另外一個非PD-1受體在淋巴結(jié)中的特異性高表達有關(guān)。若要證明我們的假設， 尚需設計試驗檢測篩查PD-1或者非PD-1受體在結(jié)腸癌患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達情況。 如果假設得到證實， 我們認為針對B7-H1/PD-1可設計相應的抗體從而阻斷PD-1與B7-H1的結(jié)合， 減少其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移， 又因為B7-H1在機體外周免疫耐受中發(fā)揮重要的作用， 似乎針對PD-1的抗體在未來更具有可行性。 這些都為我們以后的研究指明了方向。