宮頸癌是全球婦女中僅次于乳腺癌的第二個最常見的惡性腫瘤。自20世紀(jì)50年代我國開始宮頸癌篩查工作后，宮頸癌的發(fā)病率及死亡率明顯下降，但我國每年仍有新發(fā)病例約13萬，局部地區(qū)宮頸癌的發(fā)病率及死亡率仍有增長趨勢，并且部分地區(qū)還出現(xiàn)了宮頸癌患病的“年輕化”趨勢。

    腫瘤的形成、浸潤和轉(zhuǎn)移是一個多基因調(diào)控、多階段、多步驟發(fā)生的復(fù)雜過程，與腫瘤內(nèi)多種基因不斷突變和缺失而導(dǎo)致瘤細(xì)胞能夠完成轉(zhuǎn)移全過程有關(guān)，并涉及腫瘤細(xì)胞自身與宿主之間錯綜復(fù)雜的關(guān)系。在影響宮頸癌預(yù)后的諸多因素中，腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移已作為重要的獨(dú)立預(yù)后因素引起廣泛重視。目前認(rèn)為，腫瘤轉(zhuǎn)移特性分別受到“轉(zhuǎn)移相關(guān)基因”以及“轉(zhuǎn)移抑制基因”的調(diào)控。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，Rho家族成員特別是RhoA在多種腫瘤組織中有異常表達(dá)，并和腫瘤的惡性程度相關(guān)，提示其在腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中起重要作用。而腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23-H1及其相關(guān)蛋白則在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中起負(fù)性調(diào)節(jié)作用。本文重點(diǎn)探討nm23-H1、RhoA與宮頸癌的研究進(jìn)展。

    1.RhoA與宮頸癌

    1.1 Rho蛋白家族
    Rho家族蛋白是Ras超家族中的一類小分子G蛋白（又稱GTPase，即GTP酶）。大量研究發(fā)現(xiàn)，Rho家族蛋白通過影響細(xì)胞遷移對腫瘤起作用，一些動物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這一觀點(diǎn)，同時Rho家族蛋白已證實(shí)在體外通過影響細(xì)胞周期的進(jìn)展及基因的轉(zhuǎn)錄來調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和繁殖。Rho家族蛋白的這些功能特點(diǎn)決定其有望成為理想的抗腫瘤靶點(diǎn)。根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能的不同，Rho家族蛋白大致分為5個亞家族，包括：
    （1）Rho亞家族，包括RhoA、RhoB和RhoC。
    （2）Rac亞家族，包括Rac1、Rac2、Rac3和RhoG。
    （3）Cdc42亞家族，包括Cdc42、RhoQ（TC10）、RhoJ（TCL）、RhoV（Chp）和RhoU（Wrch）。
    （4）Rnd亞家族，包括Rnd1/Rnd6、Rnd3/RhoE和Rnd2/RndN。
    （5）Rho BTB亞家族，包括Rho BTB1和Rho BTB2。
    在所有的成員中，RhoA是目前研究最多的Rho蛋白之一。

    1.2 RhoA在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制
    1.2.1 調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架
    細(xì)胞骨架是由蛋白纖維交織而成的網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)，充滿著整個細(xì)胞質(zhì)的空間，通過與細(xì)胞膜及細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)聯(lián)系，維持細(xì)胞的特有形態(tài)并參與細(xì)胞的運(yùn)動，還在細(xì)胞增殖、接觸抑制、生長、凋亡等環(huán)節(jié)中起關(guān)鍵作用。幾乎在所有的腫瘤細(xì)胞中，細(xì)胞骨架都發(fā)生了一定的變化。研究發(fā)現(xiàn)RhoA可調(diào)節(jié)肌動蛋白及肌球蛋白的聚合及收縮，從而引起細(xì)胞的遷移。另外，RhoA蛋白還能影響中級細(xì)絲網(wǎng)格和微管蛋白的形成，這也是細(xì)胞遷移的重要因素。
    1.2.2 調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖
    RhoA的激活可調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子AP-1（transc**tion factor AP-1）和核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的轉(zhuǎn)錄水平，促進(jìn)細(xì)胞周期素D1（cyclinD1）的表達(dá)。RhoA表達(dá)水平的升高還可下調(diào)周期素依賴性蛋白激酶抑制劑如p21cip1、 p27kip1的表達(dá)水平[4]。這些因子表達(dá)水平的改變可共同促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。
    1.2.3 調(diào)節(jié)細(xì)胞間粘附
    有研究發(fā)現(xiàn)，上皮鈣粘附素（E-cadherin）及其介導(dǎo)的同種細(xì)胞間的粘附作用可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin和RhoA之間存在復(fù)雜的相互調(diào)節(jié)作用[5], E-cadherin介導(dǎo)的同種細(xì)胞間的粘附作用是抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和浸潤的重要機(jī)制，RhoA的高表達(dá)可能破壞這種細(xì)胞間的粘附作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。另外，有研究發(fā)現(xiàn)RhoA的高表達(dá)還能導(dǎo)致由ROCK介導(dǎo)的細(xì)胞粘附作用的破壞，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
    1.2.4 促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解
    腫瘤細(xì)胞中，Rho蛋白的高表達(dá)能增加整合素的親和性，使各細(xì)胞之間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM）之間的連接變得不再緊密，有利于細(xì)胞遷移和局部侵襲。RhoA 的高表達(dá)可促進(jìn)生長因子和整合素的高表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞具有了更易完成侵襲的能力。此外，RhoA還可通過調(diào)節(jié)金屬基質(zhì)蛋白酶及其抑制劑的表達(dá)水平來調(diào)節(jié)ECM的降解和重建，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的局部浸潤。
    1.2.5 促進(jìn)腫瘤血管生成
    有研究認(rèn)為，RhoA/Rho激酶信號通路參與由血管內(nèi)皮生長因子誘導(dǎo)的體外內(nèi)皮細(xì)胞的運(yùn)動和血管生成。Roger等推斷，RhoA可能是通過調(diào)節(jié)血管生成相關(guān)因子的表達(dá)促進(jìn)腫瘤血管生成，并與腫瘤的惡性程度相關(guān)。
    1.2.6 其他
    Sah等發(fā)現(xiàn)RhoA參與高濃度凝血酶所誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞核星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡。RhoA還參與激活磷脂酰肌醇3激酶（PI3K），從而間接控制細(xì)胞的增生、細(xì)胞生存及細(xì)胞的代謝。ECT2原癌基因編碼一種EGFs，可使RhoA過表達(dá)，從而參與到ECT2誘導(dǎo)的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程。

    1.3 RhoA與宮頸癌
    近年來研究表明，RhoA蛋白在睪丸精原細(xì)胞瘤、消化道腫瘤、肺癌、乳腺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、卵巢上皮細(xì)胞癌等惡性腫瘤中的表達(dá)均較正常組織明顯升高，但有關(guān)RhoA蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義的研究還較少。顧穎等應(yīng)用免疫組化S-P法檢測正常宮頸、不典型增生宮頸、宮頸癌組織中RhoA蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著從正常宮頸組織-宮頸不典型增生組織-宮頸鱗癌的轉(zhuǎn)化，陽性表達(dá)率呈遞增趨勢，且RhoA蛋白的表達(dá)與病理組織分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與患者年齡、FIGO臨床分期無關(guān)。從而得出結(jié)論RhoA蛋白的表達(dá)可作為判斷宮頸鱗癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)之一，檢測RhoA對了解宮頸癌生物學(xué)行為和評估預(yù)后具有一定的臨床價值。而在盧北燕[11]等人的研究中卻發(fā)現(xiàn)，RhoA蛋白的表達(dá)與病理組織分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO臨床分期有關(guān)。在對RhoA蛋白的表達(dá)與FIGO臨床分期之間的關(guān)系二者的結(jié)論存在分歧 ，有待大樣本試驗(yàn)進(jìn)行深入的研究。

    2.nm23-H1與宮頸癌

    2.1 nm23-H1基因的結(jié)構(gòu)
    1998年美國**癌癥研究所的Steeg等用消減雜交法在小鼠黑色素瘤K-1735的亞克隆株中分離出一種與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因，即nm23基因。該基因定位于人類第17號染色體，全長8?5kb，由5個外顯子和4個內(nèi)含子構(gòu)成，它的表達(dá)與多種人類腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。已發(fā)現(xiàn)nm23基因家族有9個成員（nm23-H1~nm23-H9），目前臨床研究最多的是nm23-H1和nm23-H2，其中nm23-H1與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系更為密切。
    2.2 nm23-H1基因抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制
    nm23-H1的基因產(chǎn)物與二磷酸核苷激酶（NDPK）高度相似，具有相同的活性。其基因的蛋白產(chǎn)物酶參與體內(nèi)三磷酸核苷的生成，通過以下方面發(fā)揮作用：
    （1）通過催化GTP-GDP的轉(zhuǎn)化，參與細(xì)胞骨架微管蛋白的解體與聚合，使肌球蛋白的輕鏈磷酸化，抑制細(xì)胞的遷移，抑制細(xì)胞分化，誘導(dǎo)凋亡，從而影響細(xì)胞的活動、粘附，最終抑制細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。nm23-H1基因發(fā)生缺失、突變或表達(dá)異常時，可導(dǎo)致NDPK活性改變，影響微管聚合，使細(xì)胞在減數(shù)分裂過程中出現(xiàn)紡錘體形成障礙，使染色體發(fā)生畸變或非整倍體細(xì)胞形成，促使腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移。
    （2）通過調(diào)節(jié)GTP合成參與G蛋白調(diào)控的跨膜信號傳導(dǎo)，從而對腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和轉(zhuǎn)移起重要作用。目前眾多研究已證實(shí)G蛋白介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路在細(xì)胞轉(zhuǎn)移的過程中起主要調(diào)控作用。
    Ma等從生物化學(xué)角度發(fā)現(xiàn)，當(dāng)Mg2+存在時，nm23-H1具有3'-5‘核酸外切酶活性，可從DNA的3’端逐個切割單個核苷酸。由于3'-5‘核酸外切酶活性對DNA的修復(fù)具有重要作用，故nm23-H1具有的這種修復(fù)活性可能是抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。而Zhang等利用位點(diǎn)定向誘變技術(shù)研究突變體nm23-H1的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了nm23-H1基因的轉(zhuǎn)移抑制功能需要3'-5’核酸外切酶活性。
    Cheng等的研究發(fā)現(xiàn)，nm23-H1蛋白可抑制蛋白水解酶-白明膠酶A的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而阻礙細(xì)胞外基質(zhì)及基膜的降解，增加細(xì)胞之間的粘附作用，由此抑制腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動及轉(zhuǎn)移。

    2.3 nm23-H1與宮頸癌
    Yang等將真核表達(dá)載體pcDNA3-1-nm23-H1轉(zhuǎn)染入宮頸癌細(xì)胞系HeLa、SiHa，G418穩(wěn)定篩選，用Western印跡法、免疫組織化學(xué)法鑒定轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中nm23-H1基因的蛋白表達(dá)，噻唑藍(lán)（MTT）法檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞體外增殖能力的變化。結(jié)果顯示，在宮頸鱗癌組織中，nm23-H1基因的陽性表達(dá)率隨FIGO臨床分期的升高呈下降趨勢，分化程度高的組織中陽性表達(dá)率明顯高于分化程度低的組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中其原發(fā)灶陽性表達(dá)率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。在宮頸腺癌組織中，nm23-H1基因陽性表達(dá)率與FIGO臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性。在pcDNA3-1-nm23-H1轉(zhuǎn)染組中，Si-Ha、HeLa細(xì)胞nm23-H1蛋白表達(dá)水平明顯增加，未轉(zhuǎn)染組和空載體對照組未見nm23-H1高表達(dá)。MTY法所繪生長曲線顯示，SiHa-nm23（轉(zhuǎn)染組）細(xì)胞與SiHa-3-1（空載體組）、SiHa（空白組）細(xì)胞比較，生長速度明顯抑制，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，而HeLa（空白組）、HeLa-nm23（轉(zhuǎn)染組）、HeLa-3-1（空載體組）三組細(xì)胞生長速度均無明顯變。
    結(jié)論：nm23-H1參與了宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程，是判斷宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的重要標(biāo)志物，而nm23-H1基因?qū)Σ煌瑢m頸癌細(xì)胞體外增殖能力的影響有明顯差異。但在王孝忠等人的研究中卻發(fā)現(xiàn)在宮頸浸潤癌中，nm23-H1的表達(dá)與腫瘤原發(fā)灶大小、大體類型、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和治療后復(fù)發(fā)相關(guān)；而與腫瘤的病理類型、細(xì)胞分化程度、FIGO臨床分期及發(fā)病年齡無相關(guān)性。二者的研究在腫瘤的病理類型、FIGO分期等方面存在差異，還需進(jìn)一步深入探索其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的確切機(jī)制。

    3.問題與展望

    nm23-H1基因在腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程中的機(jī)制已得到廣泛的認(rèn)可，但其調(diào)控腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制尚待進(jìn)一步的研究。RhoA蛋白幾乎與腫瘤發(fā)生的各個階段都有關(guān)系，但在聯(lián)系RhoA蛋白和腫瘤發(fā)生的各種機(jī)制中缺乏一個公認(rèn)的相對重要的機(jī)制。這就意味著需要通過體內(nèi)腫瘤發(fā)生模型、鼠遺傳學(xué)的使用等方式來進(jìn)一步確定體內(nèi)的這種重要聯(lián)系。這些研究將有可能發(fā)現(xiàn)新的抗腫瘤靶點(diǎn)，針對這些靶點(diǎn)可以研發(fā)有效的藥物或基因治療，干涉這些基因蛋白的功能，促進(jìn)腫瘤臨床治療的發(fā)展。